XY男性细胞分离方法 X与Y男性细胞的差别

XY男性细胞分离方法

沉降法

根据X、Y男性细胞在体积和重量上的差别，利用具有一定黏稠度的分离液对男性细胞进行沉淀分离，上层主要为Y男性细胞，下层主要为X男性细胞。沉降法虽然有一定的效果，但试验结果不稳定。

离心沉降法

由于X男性细胞的DNA含量高于Y男性细胞，导致X男性细胞的密度及重量大于Y男性细胞，在离心时X男性细胞的沉降速度快于Y男性细胞，下层液体中X男性细胞的含量可大大提高。此方法的优点是分离时间比般沉淀分离短得多，并对男性细胞的活力影响较小。但是X男性细胞间沉降速度的差异有时会比X与Y男性细胞间的差异还大，因此，分离结果很不稳定。

电泳法

依据X、Y男性细胞表面膜电荷的不同，通过电泳时X、Y男性细胞在电场中向不同电极移动而达到分离的目的。 Mobri等(1986)用自由电泳法处理人的**时发现，在ph7.4时，阳极侧多为X男性细胞，阴极侧多为Y男性细胞(80%)。 Engelmannl等(1988)用此方法却得到与此完全相反的结果。在许多研究报告中，采用多种形式的电泳分离但其结论不一致，分离结果也不稳定。该方法还有待进一步研究和改进。

免疫学分离法

该方法是利用h-Y抗体检测男性细胞质膜上存在的h-Y抗原，以此来分离X男性细胞和Y男性细胞。由于h-Y抗原极弱，对细胞表面h-Y抗原进行血清学和免疫学的检测效果比较初并不理想。随着生产高效价h-Y抗体方法的发展，应用h-Y抗体兔疫学亲和柱层析才成功地分离了人和小鼠的h-Y阳性和阴性男性细胞，利用h-Y抗原进行动物助孕的控制的研究取得了实质性进展。 Bryant将人和小鼠**采用h-Y抗血清免疫过滤亲和柱进行男性细胞分离，富集到的人Y男性细胞80%~90%为阳性，富集的小鼠Y男性细胞80%为阳性，富集后的X男性细胞70%为阴性。Zavos将富集后的兔男性细胞受精后助孕为78.19%，牛的男性细胞受精后助孕达74.14%，将6头公牛**处理后给50头超排母牛受精，结果在195个胚胎中有103个为助孕，占81.11%，对分离后的**给492头母牛受精后，在187头活犊中，助孕占65.12%，罗承浩等采用h-Y抗血清IgG作用乳牛**，受精后获81.18%的助孕犊牛。Jones等采用一种免疫磁力方法，其X男性细胞纯度达到98%，从上述结果看，采用h-Y抗原的免疫方法分离X、Y男性细胞是一种较有前景的分离方法，可获得高纯度的X、Y男性细胞群，但该方法存在着对Y男性细胞的损伤问题。

流式细胞分离法

流式细胞分离法是根据X、Y男性细胞上DNA含量的微小差别，通过流式细胞仪（folw cytometer)进行分离，并可同时测定X、Y男性细胞DNA含量的微小差异，进行分离时，首先将男性细胞稀释并与荧光染料 hoechst33342共同培养，这种染料可以定量地与DNA结合，男性细胞通过检测仪时被激光束激发，由于X男性细胞比Y男性细胞含较多的DNA，X男性细胞放射出较强的荧光信号，放射出的信号通过仪器和计算机系统扩增，分析并分辨X男性细胞Y男性细胞。当含有男性细胞的缓冲液离开激光系统时，借助于颤动的流动室将垂直流下的液柱变成微小的液滴。与此同时，含有单个男性细胞的液滴被充上正电荷或负电荷，并借助两块各自带正电或负电的偏斜板，把X或Y男性细胞分别引导到2个收管中。

流式细胞分离法开创了男性细胞分离的新局面，Johson等用该方法分离的兔Y男性细胞输精后，预测助孕兔比例为81%，实际得到的比例也是81%;X男性细胞输精后预测雄兔的比例为14%，实际产雄兔的比例为6%。Abeydeera等利用该法分离的猪X男性细胞授精，产助孕23头，助孕1头，准确率为97%;利用分离的Y男性细胞投精，产助孕仔猪率高达助孕。目前对活的男性细胞分离时，由于核的朝向不一致，加之尾部的影，而不能充分地对所有男性细胞准确地进行区别和分离。另外，还存在分离速度慢和时间较长的问题，分离后的男性细胞活率也受到一定影响，受胎率有所降低。但是，这是当前男性细胞分离方法中比较新的也是分离纯度较高的一种方法，如果结合显微注射技术，流式细胞分离法将成为有效的分离X、Y男性细胞的技术而被广泛应用于胚胎工程的研究与实践。

化学药品处理法

该方法根据X、Y男性细胞嗜酸碱性的不同，通过使用化学试剂预先处理**，改变生殖道的ph，从而达到选择性利用男性细胞控制动物助孕的目的。黑木常青在输精前20~30min注入某一浓度的精氨酸液1ml，结果注入高浓度和中浓度的牛产公犊的多，注入低浓度的产母犊的多。唐正飞用碱性饲料饲喂兔子并在交配前将碱性溶液注入**，所生仔兔中助孕比例达到64%~77%。从生产实用性看，如果能用控制生殖道的ph来控制助孕，那将具有重要的意义。

近几十年来人们对动物的助孕控制进行了大量的研究，如与Y男性细胞的分离、鉴定胚胎助孕、应用性激素、改变体液酸碱度、食物营养、饲喂不同金属元素、改变生殖道环境、杀死或灭活带某种染色体的男性细胞等。其中，在哺乳动物中主要应用X与Y男性细胞的分离和鉴定胚胎助孕的方法。

X与Y男性细胞的差别

Y男性细胞的F小体

1968年 Cosperson在研究男性染色体时发现，在Y染色体长臂末端发出有比其他部分强的荧光亮点，并将这些点称为F小体。1970年 Barlow等在Y男性细胞头部发现F小体，且F小体在人和家畜的男性细胞上都能见到。后来经实验反复证明，有F小体的男性细胞一定是Y男性细胞，而没有的则是X男性细胞。

男性细胞的重量

X与Y男性细胞在重量和比重上有差异，主要表现在DNA量的不同。X与Y男性细胞染色体所含DNA不同，X染色体的DNA含量比Y染色体多，重量和体积也大。两者的DNA含量差异一般在3%~5%之间，如牛为3.9%、绒鼠为7.5%。由于重量和比重的不同，而致X和Y男性细胞在液体中运动力、沉降速度等的不同。

男性细胞运动

Y男性细胞的活动能力比X男性细胞强，运动速度快，在含血清蛋白的稀释液中呈直线运动。Y男性细胞尾部膜电荷较多，而X男性细胞头部膜电荷较多。

男性细胞的耐酸碱性

Y男性细胞嗜碱性，而X男性细胞则嗜酸性。

男性细胞表面的h-Y抗原及分布

h-Y抗原即助孕特异性次要组织相容性抗原( male specific minor histocompatibility-Y antigen)，是一种弱抗原，只有Y男性细胞才能表达h-Y抗原。其分布也依男性细胞的来源不同而有差异，附睾头分离的男性细胞h-Y抗原主要分布于靠近男性细胞的尾部，附睾尾分离的男性细胞h-Y抗原主要分布在顶体后端。

尽管对X、Y男性细胞的差异已经进行了大量的工作，但是除了X、Y男性细胞的DNA含量具有明显的差异外，其他方面的差异表现甚微，还经常由于各种环境条件的不同而产生变化，需要继续深入开展研究，为发展新的男性细胞分离技术提供理论基础。

综上所述，由于每个人的身体情况是不同的，所以试管的成功率、费用等等也是有所差异的，XY男性细胞分离方法 X与Y男性细胞的差别，建议大家保持良好的心态，加强**锻炼，多吃有营养的食物，这样才会对做试管更加有好处。祝您早日好孕!

相关话题： 抚州试管生孩子 晋城三代试管婴儿费用 大连三代试管婴儿